审评五部 白玉
由于哺乳动物细胞传代细胞系(continuous cell lines,CCL)对重组蛋白质的翻译后加工、修饰比大肠杆菌、酵母和昆虫细胞具有不可替代的优点,因此,采用哺乳动物细胞CCL作为宿主细胞建立细胞库也就成为目前重组治疗用生物制品的研发和申报热点。明确的宿主细胞来源和历史可以为我们对后续建库细胞的检定提供更有针对性的策略。因此,要求培养用CCL的来源要明确。
目前,国内所用的CCL常来源于美国典型菌种保藏库(american Type Culture Collection ,aTCC),来源和历史背景比较明确,只需要注明这些细胞基质的aTCC编号及相关背景资料,提供有关的证明性文件,说明该细胞购于aTCC并可用于商业化生产。
如果申办人从天然来源中分离了细胞,建立了细胞系,就应该介绍这个细胞系的来源、分离方法、体外培养过程以及细胞系建立程序(如物理、化学、生物学方法的应用或核酸序列)。对于动物细胞系应该提供:种类、品系、饲养条件、组织或器官来源、地区来源、年龄、性别和一般生理状况,是否含有内源或外源因子的检测结果,定量培养的时间等。
下面以表格的形式介绍了审评人员和申办人应关注哪些方面的细胞背景信息资料,以及对曾经用于重组蛋白表达和目前常用的CCL来源和培养历史方面的概括性总结,希望对审评和研发工作有所帮助。
表1 确保生物制品安全、有效性所需的细胞背景信息
● 细胞的来源
实验室或培养物保藏单位 [如aTCC]
相关的科学研究文献 (理想的信息来自细胞来源的原始实验室)
● 细胞培养历史
细胞体外培养程序
细胞建系的过程(如:使用的化学或生物学步骤或引入的核苷酸序列)
基因操作内容
● 所有的细胞鉴定、特性、外源性和内源性因子的检定结果
● 对传代细胞系,还要提供:
细胞倍增的次数或
转种的次数 (转种间隔时间或稀释比例)
● 关于细胞的培养,需提供:
可能暴露于感染性物质的操作步骤
培养基的组分或添加物
● 暴露于动物源或人源性原材料的情况(如:血清、酶类和细胞因子)
表2 曾经或目前常用于蛋白表达的哺乳动物细胞系
上述表中的信息,尤其是表2,由笔者根据掌握的现有知识总结。对申报资料要求的解读系个人观点,有不恰当之处,还希望多多交流,共同进步。